微生物生长的几种检测方法
时间:2019-01-05 12:03:02 来源: 2019时时彩十大平台最新排行榜 作者:匿名


概述:

微生物细胞在适当的外部条件下持续吸收营养,并根据其自身的新陈代谢进行代谢。如果同化速率超过异化效应,则原生质体的总量(重量,体积,大小)不断增加,并且发生个体生长现象。如果这是一个平衡的增长,也就是说,每个细胞成分以适当的比例增长,那么当它达到一定水平时,它将成倍增加,导致个体数量的增加。这时,原来的个体已经发展成为一个群体。 。当个体在群体中生长时,该群体会生长,这可以通过其体积,重量,密度或浓度来衡量。微生物的生长不同于其他生物的生长。微生物的个体生长在科学研究中存在一定的困难,通常没有实际意义。微生物是大量收获的,因此,微生物的生长通常是指种群的扩大。微生物的生长和繁殖是内外各种环境因素相互作用的综合反映。因此,生长和繁殖可以作为研究各种生理,生化和遗传问题的重要指标。同时,微生物在生产实践中的各种应用或病原菌和霉菌微生物的防治与其生长抑制密切相关。 。因此,有必要引入微生物生长的检测方法。由于生长意味着原生质体含量的增加,所以确定方法也基于直接或间接,并且生殖的确定基于计数。微生物生长的测量可以通过其重量,体积,密度,浓度和指标来测量。

生长测定

体积测量方法:又称菌丝体浓度法。

通过测量一定体积培养溶液中所含的菌丝量来测量微生物的生长状态。方法是在分级离心管中取一定量的待测培养液(如10 ml),设定一定的离心时间(如5 min)和转速(如5000 rpm),之后离心,倒出在晴朗的夜晚,将上清液的体积测量为v,并且菌丝体浓度为(10-v)/10。菌丝体浓度测定是大规模工业发酵生产中微生物生长的重要监测指标。该方法相对简单,简单,快速,但有必要设置一致的加工条件,否则偏差非常大,并且由于在离心沉积物中包含一些固体营养物而存在一些偏差。干重法:

它可以通过离心或过滤来确定。通常干重为湿重的10-20%。在离心方法中,将一定体积的待测培养液倒入离心管中,设定一定的离心时间和转速,离心,用水洗涤1-5次,并干燥。干燥可在105℃或100℃的烘箱中干燥,或在红外线下干燥,或在80℃或40℃下真空干燥,然后在干燥后称重。如果使用过滤方法,可以用滤纸过滤丝状真菌,用过滤膜如醋酸纤维素膜过滤细菌,过滤,用少量水洗涤,40℃真空干燥。 C。干重发方法更麻烦。当获得的微生物产品通常是细菌细胞时,经常使用这种方法,例如活性干酵母(ADY),以及使用微生物细胞作为活性物质的一些饲料和肥料。

比浊法:

微生物的生长导致培养物的浊度增加。通过紫外分光光度计测量特定波长下的吸光度,以确定微生物的生长状态。当计时培养物中细胞的生长时,可以使用具有侧臂的特殊三角形烧瓶。通过将侧臂插入光电色度计的比色孔中,可以在任何时间测量生长而不必服用细菌溶液。该方法主要用于监测发酵工业中细菌细胞的生长。例如,我使用UNICO的紫外 - 可见分光光度计测量波长为600纳米的发酵液的吸光度OD600,用比色管监测大肠杆菌的生长和诱导时间。

菌丝长度测量方法:

对于丝状真菌和一些放线菌,菌丝生长的长度可以在培养基上测量一段时间,或者通过使用一端打开并按比例放置的薄玻璃管进入适当的培养基中,将微生物接种于开口的一端,在一段时间后记录菌丝体的生长长度,从而测量丝状微生物的生长。微生物计数

血细胞计数板方法:

血细胞计数器是一块厚厚的玻璃,具有特殊的结构尺度和厚度。滑块有四个凹槽和两个转弯。该中心有一个短横向沟槽和两个平台。双排工作台比两个平台的表面高0.1毫米。每个平台都刻有不同规格的网格,中央0.1 mm2区域刻有400个小方块。通过观察油显微镜并计算某个大网格中的微生物数量,可以计算出1ml细菌液体中含有的细菌数量。该方法简单,直观,快速,但仅适用于在单细胞状态下对由微生物或丝状微生物产生的孢子进行计数,结果是包括死细胞在内的总细菌。染色计数方法:

为了弥补一些微生物无法在油镜下观察和计数,并通过血细胞计数板法直接区分死细胞和活细胞,发明了染色方法。通过用不同的染料适当地染色细胞,在显微镜下进行活菌计数更方便。例如,酵母的活细胞计数可以用亚甲蓝染色,染色后,在显微镜下观察,活细胞是无色的,而死细胞是蓝色的。

比例计数方法:

将已知细菌(例如霉菌孢子或红细胞)的液体浓度和待测细胞浓度的细菌液体以一定比例均匀混合,并在显微镜视野中计数各自的数量以获得细胞未知细菌液的浓度。这种计数方法相对广泛。还必须配制已知颗粒浓度的悬浮液作为标准。

液体稀释法:

连续10倍连续稀释的未知细菌样品,5ml样品来自最合适的三个连续10倍稀释液,根据估计,接种于1 ml至3组15管培养基培养后,记录数量在每个稀释液中生长管,然后检查表的最大数量以获得样品中的细菌数,并根据样品的稀释因子计算活细菌含量。该方法通常用于检测食品中的微生物,例如饮用水和牛奶的微生物限度测试。

平板菌落计数方法:

这是最常用的活细菌计数之一。将待测细菌液体进行梯度稀释,并在固化前将一定体积的稀释细菌液体与合适的固体培养基均匀混合,或将细菌液体施加到固化的固体培养基平板上。孵育后,原始细菌溶液中的细菌数量可以通过将细菌溶液的稀释度乘以板上出现的菌落数来计算。通常优选在直径为9cm的平板上具有50-500个菌落。然而,该方法很麻烦并且操作员需要熟练的技术。平板菌落计数法不仅可以获得细菌液中含有细菌的细菌,还可以同时分离培养细菌液中的细菌,得到单克隆抗体。

试剂纸方法:

基于平板计数方法,已经开发出用于快速计数的小型商业产品。该形式具有小的厚滤纸,琼脂片等。将合适的介质吸入滤纸和琼脂片中,加入活性指示剂2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC,无色),置于试验袋液体中,然后密封在密封袋中。培养。在短期培养后,可以将滤纸上的一定密度的玫瑰微菌落与标准纸样品进行比较,以估计样品的细菌含量。试剂纸方法快速准确,避免了计数法的人为操作误差。膜过滤方法:

用特殊滤膜过滤一定体积的含细菌样品,用橙色染色后在紫外显微镜下观察细胞荧光,活细胞发出橙色荧光,死细胞发出绿色荧光。荧光。

生理指标方法:

微生物的生长伴随着一系列生理指标,如pH,发酵液中的氮含量,糖含量,产气量等。有许多与生长量平行的生理指标,它们可以作为相对的。增长测量值。氮含量的测定:

大多数细菌的氮含量为干重12.5%,酵母7.5%,霉菌6.0%。粗蛋白质含量可以基于氮含量x 6.25确定。有许多测定氮含量的方法,如硫酸,高氯酸,碘酸,磷酸等,以及Dumas N2气法。 Dumas通过将样品与CuO混合,在CO2气流中加热以产生氮气,将其收集在呼吸计中,并通过用KOH吸收CO2来测量N2的量来测量N2气体方法。

碳含量的测定:

将少量(干重0.2-2.0mg)生物材料混入1ml水或无机缓冲液中,并在100℃下用100ml 2%K2Cr2O7溶液加热30分钟,然后冷却。通过用水稀释至5ml并读取波长为580nm的吸光度,可以估算生长量。试剂应用作空白对照,标准样品应用作标准曲线。

还原糖分析:

还原糖通常是指单糖或低聚糖,其可以直接被微生物利用。还原糖的测量可间接反映微生物的生长,并且通常用于大规模工业发酵生产中的微生物生长的常规监测。该方法包括以下步骤:离心发酵液,取上清液,加入Feilin试剂,在沸水浴中煮沸3分钟,取少量盐酸酸化,加入淀粉溶液至终点。 Na2S2O3,继续添加Na2S2O3至终点,并读取表格以读取还原糖。内容。

氨基氮的测定:

方法是:离心发酵液,取上清液,加入甲基红和盐酸作为指示剂,加入0.02N NaOH进行着色,直至颜色刚刚褪色,向基质中加入18%的中性甲醛,反应几次。加入0.02,制备N的变色,根据NaOH的量计算氨基氮的含量。根据培养液中氨基氮的含量,可以间接反映微生物的生长状态。其他生理物质的测定:

P,DNA,RNA,ATP,NAM(乙酰胞壁酸)等含量和产酸量,产气量,CO2产量(使用标记葡萄糖作为底物),耗氧量,粘度,产热量等指标,均可用于增长决心。还可以基于反应之前和之后底物浓度的变化以及最终气体产生和微生物活性的确定来反映微生物的生长。例如,在BMP-2的发酵生产中,我可以随时监测溶解氧的变化和pH的变化,以判断细菌的生长。

资料来源:BioNet

[关键词]生命科学,技术突破,国家标准物质网络

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